Tema: “Diversidad
de Rotavirus A en niños con gastroenteritis aguda en Lima, Perú”
Objetivo: Determinar la frecuencia de Rotavirus A en
muestras e Identificar los genotipos de Rotavirus A presentes en las muestras
positivas mediante la amplificación de los genes VP7 (G) y VP4 (P) por RT-PCR.
Muestra:
heces provenientes de una población infantil con gastroenteritis aguda
Gen a amplificar:
VP7 (G) y VP4 (P)
ADN: ARN
viral
Extracción de ADN: El ARN viral de doble cadena se extrajo
con el kit de extracción QIAmp Viral RNA de Qiagen (Catalog #52904/6)
Tipo de PCR: qRT-PCR
Procedimiento:
Se preparó un pre mix con los cebadores, añadiendo 2 μl por
reacción de 20 μM NVP3- FDeg y 2 μl por reacción de NVP3-R1.
Posteriormente se añadieron 2 μl de ARN a la mezcla de
cebadores.
La mezcla se
desnaturalizó en un termociclador a 97°C por 5 minutos.
Se preparó el master mix usando el Kit QuantiTect® Probe
RT-PCR (QIAgen Catalog # 204443). Posteriormente, se agregaron los 6μl del mix ARN
y cebadores a los tubos con el master mix.
Se colocaron los tubos en el termociclador (Lighcycle™ 96) y
se realizó el siguiente perfil de ciclos: 45
ciclos de 95ºC por 15 segundos y 1 minutos a 60ºC.
Hibridación: 30 segundos 50ºC
Elongación: 15 segundos a 95ºC
Conclusión:
Rotavirus estuvo presente en el 10% de las muestras analizadas mediante el test
de qRT-PCR. El 62.2% de los casos positivos se presentó entre niños, mientras
que el 37.78% de niñas obtuvo resultados positivos; no existiendo diferencia
significativa. En el presente estudio, se reporta por primera vez en el Perú la
presencia del genotipo G12P[8] perteneciente al linaje III.
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja&uact=8&ved=2ahUKEwiqguO1pKTjAhXBx1kKHUrRAeQQFjAAegQIAxAB&url=http%3A%2F%2Frepositorio.urp.edu.pe%2Fhandle%2Furp%2F590&usg=AOvVaw1hJ4dsrVsJjcYsS1uzqHfl
